Isi

• Perbedaan utama
• Southern Blotting vs. Western Blotting
• Grafik perbandingan
• Apa itu Southern Blotting?
• Apa itu Western Blotting?
• Perbedaan utama
• Kesimpulan

Perbedaan utama

Perbedaan utama antara Southern Blotting dan Western Blotting adalah Southern Blotting adalah teknik yang digunakan untuk mendeteksi fragmen DNA spesifik dalam sampel tertentu sedangkan Western Blotting digunakan untuk mengetahui protein spesifik dalam sampel yang diberikan.

Southern Blotting vs. Western Blotting

Blotting adalah teknik yang digunakan oleh para ilmuwan untuk memisahkan berbagai jenis molekul dari campuran atau sampel. Dalam teknik ini, makromolekul seperti asam nukleat (DNA dan RNA) dan protein dalam campuran bergerak melalui lempengan gel. Di sini, partikel-partikel kecil akan bergerak lebih cepat daripada yang lebih besar. Molekul-molekul ini ditekan pada permukaan membran amobil yang mentransfer molekul ke membran. Ada berbagai jenis blotting berdasarkan deteksi bahan tertentu, yaitu, blotting selatan, blotting utara, dan western blotting. Southern blotting adalah jenis blotting yang digunakan untuk mendeteksi DNA sedangkan western blotting digunakan untuk mencari protein. Southern blotting dikembangkan oleh Edward M. Southern pada tahun 1975. Jadi, itu dikenal sebagai Southern blotting. Di sisi lain, western blotting dikembangkan oleh kelompok George Stark di Universitas Stanford pada tahun 1979. Nama ini digunakan untuk mencocokkan dengan blotting selatan. Southern blotting digunakan untuk mengetahui urutan DNA tertentu sedangkan, western blotting digunakan untuk mengetahui asam amino atau urutan protein spesifik.

Grafik perbandingan

Apa itu Southern Blotting?

Southern blotting adalah metode blotting tertua yang diberikan oleh Edwin Southern sehingga dinamakan blotting selatan. Ini digunakan untuk mengetahui urutan DNA tertentu dalam sampel atau campuran tertentu. Langkah-langkah yang melibatkan selama blotting selatan adalah elektroforesis, transfer, dan deteksi urutan tertentu. Pertama-tama, DNA difragmentasi dengan bantuan enzim restriksi spesifik. Kemudian fragmen DNA yang diinginkan dipisahkan melalui elektroforesis gel. Fragmen ini didenaturasi dengan bantuan larutan alkali, mis., NaOH, dll. Untuk memisahkan dua untai DNA. Fragmen DNA beruntai tunggal ini kemudian ditransfer pada membran melalui proses blotting. DNA yang terikat membran ini kemudian diperlakukan dengan probe berlabel. Probe ini akan menempel pada untaian komplementer pada DNA membran yang dapat divisualisasikan dengan autoradiogram dll.

Apa itu Western Blotting?

Metode western blotting ditemukan oleh kelompok George Stark di Stanford University yang digunakan untuk mengidentifikasi urutan asam amino tertentu dalam protein. Ia juga dikenal sebagai protein blot atau imun-blotting. Langkah-langkah selama western blotting adalah elektroforesis, transfer, dan deteksi protein spesifik. Pertama-tama, homogenisasi campuran tersebut. Kemudian pisahkan molekul yang diinginkan dengan bantuan elektroforesis. Transfer molekul-molekul ini pada membran dan identifikasi protein spesifik dengan menggunakan probe spesifik.

Perbedaan utama

1. Suatu teknik yang digunakan untuk mengetahui urutan DNA spesifik dalam campuran yang diberikan dikenal sebagai blotting selatan sedangkan, teknik yang digunakan untuk mengetahui urutan asam amino spesifik dari protein dalam campuran yang diberikan dikenal sebagai Southern Blotting.
2. Southern blotting dikembangkan oleh Edward M. Southern pada tahun 1975 sehingga dikenal sebagai Southern Blotting. Di sisi lain, western blotting dikembangkan oleh kelompok George Stark di Universitas Stanford pada tahun 1979.
3. Southern blotting digunakan untuk mencari tahu urutan DNA tertentu. Sebaliknya, western blotting digunakan untuk mengetahui urutan asam amino atau protein tertentu.
4. Southern blotting bekerja berdasarkan prinsip hibridisasi di sisi lain; western blotting bekerja berdasarkan prinsip metode deteksi imun atau interaksi antigen-antibodi.
5. DNA beruntai tunggal atau kadang-kadang RNA digunakan sebagai probe di Southern blotting di sisi lain, di western blotting antibodi primer dan sekunder digunakan sebagai probe.
6. Elektroforesis gel agarosa digunakan di selatan blotting sedangkan SDS PAGE / Polyacrylamide gel digunakan untuk memisahkan protein dalam western blotting.
7. Di sisi lain, Southern blotting mengikuti prosedur transfer kapiler; western Blotting mengikuti prosedur transfer listrik.
8. Selama Southern blotting, sampel harus didenaturasi, sedangkan, selama western blotting, sampel harus dalam keadaan asalnya.
9. Tidak ada langkah seperti pemblokiran yang terlibat dalam pembekuan selatan pada sisi lain, selama pembekuan barat, situs-situs antibodi nonspesifik diblokir pada kertas nitroselulosa dengan bantuan susu bubuk atau bovine serum albumin (BSA).
10. Metode pelabelan umum yang digunakan dalam blotting selatan adalah penggunaan pewarna kromogenik atau pelabelan radiool atau pelabelan fluoresen, dll.
11. Deteksi cahaya, Autoradiograf, dan Perubahan warna digunakan sebagai metode deteksi di blotting selatan, sedangkan metode deteksi di western blotting adalah perubahan warna dan deteksi cahaya, dll.
12. Southern blotting digunakan dalam deteksi DNA, pengujian paternitas, meraba DNA, untuk identifikasi korban, untuk mengidentifikasi penjahat, untuk menemukan agen infeksi dan untuk mengidentifikasi mutasi atau penyusunan ulang gen, dll. Sebaliknya, western blotting digunakan untuk menemukan jumlah protein dalam suatu campuran, untuk mendeteksi keberadaan HIV, virus, dan bakteri, dll dalam serum, untuk mengetahui protein yang rusak dan digunakan sebagai ukuran pasti untuk herpes, hepatitis B, penyakit Lyme, dan penyakit Creutzfeldt-Jacob, dll.

Kesimpulan

Diskusi di atas merangkum bahwa Southern Blotting adalah teknik blotting tertua yang digunakan untuk mengetahui segmen DNA spesifik dalam sampel sedangkan Western Blotting ditemukan belakangan dan digunakan untuk mengidentifikasi urutan asam amino atau protein tertentu.